ATCC細(xì)胞株的配制

　　(1)稱量和熬煮

　　按細(xì)胞株配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。濾液補(bǔ)充水分到1000ml。

　　(2)加熱溶解

　　把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂*溶解后，再補(bǔ)充水分至所需量。

　　(3)分裝

　　按實(shí)訓(xùn)要求，將配制的細(xì)胞株分裝入試管或500ml三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)可用三角漏斗以免使細(xì)胞株沾在管口或瓶口上造成污染。

　　分裝量：ATCC細(xì)胞株約為試管高度的1/5，滅菌后制成斜面，分裝入三角瓶?jī)?nèi)以不超過其容積的一半為宜;半固體細(xì)胞株以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。

　　(4)加棉塞

　　細(xì)胞株分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進(jìn)入細(xì)胞株內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。

　　(5)包扎

　　加塞后，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋扎好，用記號(hào)筆注明細(xì)胞株名稱、組別、配制日期。

　　ATCC細(xì)胞株配制注意事項(xiàng)

　　1.細(xì)胞株經(jīng)滅菌后，必須放在37C溫箱培養(yǎng)24h，無(wú)菌生長(zhǎng)者方可使用。

　　2.ATCC細(xì)胞株一般不需要調(diào)pH。對(duì)于要調(diào)節(jié)pH的細(xì)胞株，一般用pH試紙測(cè)定其pH。如果細(xì)胞株偏酸或偏堿時(shí)，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)時(shí)應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿破壞細(xì)胞株成分。

　　3.細(xì)胞株在使用時(shí)也可以做成不含瓊脂的液體細(xì)胞株，用于菌類的震蕩培養(yǎng)。

　　4.ATCC細(xì)胞株也可以加入氯霉素或土霉素，加入量為0.2g/L細(xì)胞株，主要是為了抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，減少干擾性。